生物安全實驗室自查報告集錦
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生物安全實驗室自查報告集錦1
一、實驗?zāi)康模?/strong>
1、掌握顯示細(xì)胞中過氧化物酶反應(yīng)的原理和方法。2。了解細(xì)胞凋亡的生物學(xué)意義
3、掌握凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢測方法
二、實驗原理：
1、細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物，用聯(lián)苯胺處理標(biāo)本，細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色的聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變?yōu)樽厣a(chǎn)物，因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判定過氧化物酶的.有無或多少。中間產(chǎn)物藍(lán)色聯(lián)苯胺是不穩(wěn)定的，無需酶的參加即可氧化為棕色化合物。
2、細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞在生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束其生命的過程。它是一個主動的、高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過程。
3、凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是：體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮；細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍（邊緣化）；細(xì)胞膜有小泡狀形成；晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體；根據(jù)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行顯微觀察是檢測細(xì)胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。
三、實驗步驟：
細(xì)胞中過氧化物酶的顯示
1、在載片上滴一滴PBS緩沖液；
2、取骨髓細(xì)胞：用斷頸法處死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剝出后肢股骨，剪開股骨一端，用牙簽尖的一端插入剪開的小孔中，摳取少許骨髓細(xì)胞置滴有PBS的載片上；
3、涂片：用另一玻片將骨髓細(xì)胞沿一個方向涂布推開，室溫晾干；
4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸銅液，以蓋滿涂片為宜，處理30秒—1分鐘。
5、傾去硫酸銅液，直接滴入聯(lián)苯胺混合液反應(yīng)6分鐘（以蓋滿涂片為宜）
6、清水沖洗，番紅復(fù)染2min。
7、鏡檢：清水沖洗，室溫晾干，先低倍鏡下觀察，后換高倍鏡下觀察（油鏡100×）
細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測與觀察吉姆薩染色：
1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中（有細(xì)胞面朝上）
2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞
3、95%乙醇固定5min
4、PBS緩沖液洗2次
5、吉姆薩染色液染色5min
6、蒸餾水輕輕洗去染液
7、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。
吖啶橙染色：
1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中（有細(xì)胞面朝上）
2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞
3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min
4、PBS緩沖液洗2次每次1min
5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min
6、蒸餾水輕輕洗去染液
7、選用藍(lán)光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀察。
四、結(jié)果與分析：
1、根據(jù)隨機選擇的幾個視野的統(tǒng)計，該樣品的細(xì)胞凋亡率=227/506×100=44.9
2、Hela細(xì)胞凋亡過程中核染色質(zhì)的形態(tài)變化（吖啶橙染色）
五、思考題：
1、細(xì)胞凋亡的調(diào)控機制
細(xì)胞凋亡是一個受基因調(diào)控、眾多細(xì)胞膜受體和胞漿蛋白參與的細(xì)胞主動自殺過程，其觸發(fā)因素多種多樣，包括細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)因子和抑制因子對細(xì)胞凋亡的調(diào)控。
2、細(xì)胞凋亡的特征
凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是：體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮；細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍（邊緣化）；細(xì)胞膜有小泡狀形成；晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體。
3、研究細(xì)胞凋亡的方法
定性的研究方法：常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉(zhuǎn)瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀察（普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡）
定量或半定量的研究方法：各種流式細(xì)胞儀方法、原位末端標(biāo)記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。
生物安全實驗室自查報告集錦2
為深入實施《病原微生物實驗室生物安全條例》，進(jìn)一步規(guī)范我院實驗室生物安全管理，根據(jù)上級安排，對我院實驗室生物安全管理進(jìn)行自查，情況如下：
一、實驗室資質(zhì)和備案情況
醫(yī)院檢驗科已于20xx年x月向衛(wèi)計委申請BSL2實驗室備案，實驗室資質(zhì)已于20xx年x月通過邢臺市臨檢中心現(xiàn)場評審。
二、實驗室生物安全組織機構(gòu)、管理體系及各項規(guī)章制度的運行情況
我院已成立生物安全委員會及工作領(lǐng)導(dǎo)小組，委員會明確了職責(zé)，建立了工作制度，檢驗科在此基礎(chǔ)上建立實驗室安保制度，并定期對有關(guān)生物安全各項規(guī)章制度的運行情況進(jìn)行檢查，對存在的問題及時進(jìn)行整改。實驗室所從事的實驗活動均嚴(yán)格遵守有關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)和實驗室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程，并指定專人監(jiān)督檢查實驗室技術(shù)規(guī)范和操作規(guī)程的落實情況。同同時，對檢查情況進(jìn)行詳細(xì)記錄，定期召開會議討論工作中發(fā)現(xiàn)的問題，及時糾正。
三、人員培訓(xùn)與管理
目前檢驗科共有工作人員4名，全部為專業(yè)技術(shù)人員，三名均獲得檢驗專業(yè)資格資質(zhì)，并建有實驗室工作人員健康檔案，所有實驗室的活動均符合有關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、技術(shù)規(guī)范和操作規(guī)程，非實驗有關(guān)物品不得進(jìn)入實驗室，實驗操作人員防護(hù)水平符合相關(guān)規(guī)定。
四、實驗室環(huán)境、設(shè)施及設(shè)備
實驗室入口處張貼有生物安全危害標(biāo)識，走廊設(shè)置緊急撤離路線標(biāo)識，實驗室內(nèi)整潔無與實驗無關(guān)物品，實驗室內(nèi)各消毒用品均在有效期內(nèi)，實驗室內(nèi)設(shè)有洗手池及洗眼裝置。各儀器運行狀態(tài)正常，均有相關(guān)操作及維護(hù)程序，實驗室內(nèi)配備1臺生物安全柜，放置位置合理，使用規(guī)范，均已定期更換濾網(wǎng)并委托專業(yè)機構(gòu)進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果合格。
五、實驗室記錄和檔案
目前實驗室尚未通過生物安全審批，但已申請備案，病原微生物實驗室活動均有記錄，樣本保存及銷毀均有記錄，消毒液配制及使用均有記錄，實驗室備有緊急安全防護(hù)裝備（隔離衣、防護(hù)服、護(hù)目鏡、N95口罩、橡膠手套）定期檢查，均在效期，實驗室各設(shè)備均有使用維護(hù)記錄，操作人員已通過考核。
六、實驗室應(yīng)急預(yù)案
實驗室有針對相關(guān)意外事故的緊急預(yù)案，工作人員能熟練掌握并及時處理。
七、防護(hù)
有專門人員承擔(dān)院感控制工作，實驗室人員每年有體檢，并有健康檔案，個人防護(hù)用品充足。
八、菌（毒）種和樣本的儲藏與管理
目前本實驗室不保存病原微生物菌（毒）種病原微生物，樣本管理嚴(yán)格登記制度，樣本在離開實驗室前均進(jìn)行高壓滅菌銷毀時做好銷毀登記。
九、實驗室廢棄物管理
按照《醫(yī)療廢物分類目錄》對醫(yī)療廢物進(jìn)行分類收集、包裝物、容器符合標(biāo)準(zhǔn)，警示物品醒目，不存在醫(yī)療廢物混入生活垃圾的'情況，使用后的一次性醫(yī)療器械按照感染性廢物進(jìn)行銷毀、消毒管理，醫(yī)療廢物轉(zhuǎn)運交接完整。從業(yè)人員每年進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)，并配備必要防護(hù)用品，實驗室要對樣本進(jìn)行高壓滅菌并記錄欠完整，實驗室臺面消毒沒有登記。
整改具體措施
1、管理者及工作人員對生物安全的認(rèn)識和管理水平尚不夠高，在思想上、管理制度上準(zhǔn)備不充分，對于個人防護(hù)及環(huán)境生物污染的意識不強，從而導(dǎo)致條例、法規(guī)、制度的不完善，管理力度不足。所以要進(jìn)一步完善各種規(guī)章制度，加強管理力度。
2、多年來實驗室工作人員大多數(shù)專業(yè)人員只偏向于檢驗專業(yè)技術(shù)的提高，未系統(tǒng)學(xué)習(xí)生物安全方面的知識，對預(yù)防微生物污染的意識不強，缺乏具體的技術(shù)操作規(guī)范。所以，加強生物安全方面的知識的培訓(xùn)，對全科工作人員進(jìn)行生物安全知識考試。
3、建立了實驗室臺面消毒登記本。完善了高壓鍋消毒登記，加強了生物安全的管理。
通過這次對微生物實驗室生物安全管理工作自查，提高提高了全體檢驗人員對微生物實驗室生物安全管理工作重要性的認(rèn)識，加強管理，采取有效整改措施，確保實驗室工作安全
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